“廣防己”冒充“防己”？島津邀您共享馬兜鈴酸檢測整體方案
發(fā)布時間:2021-07-30 閱讀次數(shù)：862次
導語
5月25日，國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布“風痛安膠囊中馬兜鈴酸Ⅰ成分檢查項補充檢驗方法”。
圖片來源：國家藥品監(jiān)督管理局
風痛安膠囊用于濕熱阻絡所致的痹病，癥見關節(jié)紅腫熱痛、肌肉酸楚，是治療急、慢性風濕性關節(jié)炎的非處方藥。
但由于防己的來源復雜，品種較多，且各地用藥的習慣不同，造成同物異名或同名異物；以及野生資源愈來愈少；價格攀升；藥農誤采或有意混采等諸多原因，造成市場上經常出現(xiàn)以同屬植物的根冒充防己，或用馬兜鈴科植物的根或莖與防己混用現(xiàn)象，這些藥材與正品防己的功效、主治相差較大。尤其用馬兜鈴科防己（漢中防己、廣防己、宜賓防己、冕寧防己、）替防己藥材進行投料時，由于馬兜鈴科植物中含馬兜鈴酸類物質：馬兜鈴酸（AAs）和馬兜鈴內酰胺（ALs），已經被證實具有腎毒性、致癌和致基因突變作用，且含馬兜鈴酸類物質的藥用植物和制劑因此被多數(shù)國家禁用。
針對市場上可能存在含有馬兜鈴酸類成分的馬兜鈴科防己（宜賓防己、廣防己、冕寧防己、漢中防己）替代防己藥材摻偽生產的風險，建標單位采用液質聯(lián)用建立了風痛安膠囊中馬兜鈴酸Ⅰ成分檢查項補充檢驗方法。
以下數(shù)據(jù)及圖譜引自甘肅省藥品檢驗研究院，已獲得甘肅省藥品檢驗研究院授權使用。
檢測儀器
液相色譜串聯(lián)三重四極桿質譜儀
色譜條件
色譜柱：Shim-pack GIST-HP C18 (2.1×100mm，3.0μm)，流速0.2 ml/min，流動相A為0.1%甲酸（含5mmol/L甲酸銨）溶液，B為乙腈，柱溫：40℃，進樣體積2μl。進行梯度洗脫。
表1梯度洗脫程序
更高惰性，高耐久性
● Shim-pack GIST C18 是在新型的更高惰性硅膠基質上鍵合通用性的十八烷基的色譜柱，由于色譜柱的高惰性，大幅度提高了分析的精度和色譜柱的重現(xiàn)性。
● GIST 系列色譜柱可以用于分離離子化的化合物而不易引起吸附，因此能夠得到非常尖銳的峰型和優(yōu)異的重現(xiàn)性。
● 采用新型硅膠，GIST 系列可以耐受 pH1-10 的寬 pH 范圍流動相，在堿性的分析條件下也能得到穩(wěn)定的分離。
質譜條件
電噴霧離子源（Electronic Spray Ionization，ESI），正離子掃描，多反應監(jiān)測模式（MRM）；干燥氣溫度350℃；干燥氣流速10 L/min；霧化氣壓力30 psi；源電壓4000V；保留時間：16min；母離子359.0 m/z，子離子298.0（定量離子）m/z；子離子296.0 （定性離子）m/z。
專屬性實驗
在含廣防己的風痛安膠囊為陽性樣品中，與馬兜鈴酸Ⅰ對照相應保留時間位置上，均呈現(xiàn)上述離子流色譜峰；而陰性樣品和正常樣品中，在與馬兜鈴酸Ⅰ對照品相應保留時間位置上均無相應的離子流色譜峰。說明風痛安膠囊中的其它藥味對測定無干擾。
馬兜鈴酸Ⅰ對照（a）、陰性樣品（b）、陽性樣品（c）的離子色譜圖（m/z 359.0→298.0，296.0）
基質效應考察
在液質聯(lián)用法測定中，通常情況下，樣品中的基質對待測成分的電離有影響。風痛安膠囊中除了可能含馬兜鈴酸Ⅰ藥材，尚含有其它植物藥材，以相應濃度的風痛安膠囊陰性樣品基質與以甲醇為溶劑的對照品溶液進行比較，發(fā)現(xiàn)風痛安膠囊陰性樣品基質對待測成分的電離響應值影響不是很明顯。
馬兜鈴酸Ⅰ（1μg/ml）的70%甲醇溶液；（b）馬兜鈴酸Ⅰ（1μg/ml）的基質溶液的離子色譜圖（m/z 359.0→298.0，296.0）
工作曲線與線性范圍
取馬兜鈴酸Ⅰ對照品12.02mg，加甲醇逐步稀釋至約1.0μg/ml。取上述溶液分別進樣0.1、0.5、1、2、4和8μl，以馬兜鈴酸Ⅰ對照品濃度（μg/ml）對色譜峰面積進行線性回歸，繪制標準曲線。
馬兜鈴酸Ⅰ線性關系數(shù)據(jù)
進樣精密度
精密吸取馬兜鈴酸Ⅰ對照品溶液，注入液相色譜儀。連續(xù)進樣5次，測定峰面積RSD（n=5）為2.7%，表明儀器精密度良好。結果見下表。
進樣精密度測定結果
重復性試驗
精密稱取同一批號的供試品溶液5份，按本標準擬定的方法平行測定，并計算樣品中待測成分的含量RSD（n=5）為2.2%，表明供試品溶液重復性良好。
供試品溶液測定結果的重復性
回收率測定
精密稱取已知含量同一批號的樣品6份，按供試品中馬兜鈴酸Ⅰ含量的100%，精密加入馬兜鈴酸Ⅰ對照品儲備溶液0.2ml，置具塞錐形瓶中，氮氣吹干，精密稱取樣品約1.25g于同一錐形瓶中按試品溶液的制備方法同法處理，測定馬兜鈴酸Ⅰ含量，并計算加樣回收率。
加樣回收率試驗結果
2.6.8 檢出限及定量限試驗
將線性項下溶液圖譜進行計算信噪比為10的為定量限，信噪比為3的為檢出限。
以上是風痛安膠囊中馬兜鈴酸Ⅰ成分檢查項檢測解決方案，島津針對《中國藥典》2020年版“九味羌活丸”中新增馬兜鈴酸Ⅰ成分檢查項制定了檢測方案，完整應用報告請在島津官網(wǎng)下載：LCMS-8040分析中藥九味羌活丸中的馬兜鈴酸Ⅰ（復制網(wǎng)址前往瀏覽器打開https://www.shimadzu.com.cn/an/literature/LCMS/AP_News/AP_News_LCMSMS-508.html）
供試品及限度對照品（紅色：供試品，黑色：對照品20ng/mL）
針對制劑中常用藥味“細辛”，島津創(chuàng)新中心建立了中草藥DPiMS用于馬兜鈴酸類物質的快速篩查和定量分析方法，該方法能夠在20s 內完成4 種馬兜鈴酸和1 種馬兜鈴內酰胺的定性定量分析：DPiMS-8060 快速篩查和定量檢測細辛和天仙藤中的馬兜鈴酸和馬兜鈴內酰胺。(復制網(wǎng)址前往瀏覽器打開https://www.shimadzu.com.cn/an/literature/DPIMS/AP_News_DPIMS-001.html)
標準樣品的MRM色譜圖（10.0μg/L）
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LCMS-8045分析鼻淵舒口服液及鼻淵舒膠囊中馬兜鈴酸Ⅰ(https://www.shimadzu.com.cn/an/literature/LCMS/AP_News_LCMSMS-546.html)
LCMS-8050測定辛芩顆粒制劑中4種馬兜鈴酸（https://www.shimadzu.com.cn/an/literature/LCMS/AP_News/AP_News_LCMSMS-521.html）
馬兜鈴酸及馬兜鈴內酰胺的含量測定方法建立（https://www.shimadzu.com.cn/an/literature/LCMSMS/AP_News_LCMSMS-323.html）