國標(biāo)解讀丨動物毛發(fā)MALDI-TOF定性定量檢測方法
發(fā)布時間:2023-11-20 閱讀次數(shù)：1096次
GB/T 42699.2-2023《紡織品 某些動物毛纖維蛋白質(zhì)組定性和定量分析 第2部分：還原蛋白質(zhì)多肽分析基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）法》，在2023-08-06正式發(fā)布，將在2024-03-01正式實施。該國家標(biāo)準(zhǔn)由 TC209（全國紡織品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會）歸口，TC209SC1（全國紡織品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)分會）執(zhí)行 ，主管部門為中國紡織工業(yè)聯(lián)合會。
標(biāo)準(zhǔn)概要
? 該標(biāo)準(zhǔn)修改采用ISO國際標(biāo)準(zhǔn)：ISO 20418-2：2018。國際標(biāo)準(zhǔn)是基于島津MALDI-TOF系統(tǒng)上開發(fā)，并在日本發(fā)行。
? 國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)的差異其中之一是將國際標(biāo)準(zhǔn)采用的帶反射模式（島津AXIMA Performance），更改為反射模式或線性模式。適用MALDI-TOF機型擴展為線性模式的臺式機MALDI-TOF同時適用標(biāo)準(zhǔn)。
? 該標(biāo)準(zhǔn)目的是確立采用MALDI-TOF法測定紡織品中動物毛纖維混合物組分的定性定量方法。
動物毛纖維蛋白質(zhì)組定性和定量分析MALDI-TOF法原理
使用十二烷基磺酸鈉（SDS）/二硫蘇糖醇（DTT）/磷酸鹽緩沖液，提取動物毛發(fā)中的蛋白質(zhì)。提取的蛋白質(zhì)經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）純化，再經(jīng)胰蛋白酶對凝膠中的蛋白質(zhì)進行酶解。使用MALDI-TOF-MS對物種特異的蛋白質(zhì)比例進行分析。對照標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出混合物中各動物毛纖維的含量。
物種特異峰值出現(xiàn)的分子量范圍為2450 m/z~2750 m/z，各種動物毛纖維特種峰值在標(biāo)準(zhǔn)中已列出：
動物毛發(fā)鑒別分析技術(shù)在各個領(lǐng)域都起著重要作用。獸毛被用于制作外套、上衣、毛衣等各種纖維制品。制作這樣的纖維制品時，有義務(wù)根據(jù)家庭用品品質(zhì)標(biāo)識法對纖維的種類、使用多種纖維時的混用率進行標(biāo)識。另外，毛發(fā)混入食品中時，確定毛發(fā)種類對明確混入途徑至關(guān)重要。
經(jīng)過胰蛋白酶處理的多肽采用MALDI-TOF MS分析。用MALDI-TOF MS檢測金屬靶板上的結(jié)晶樣品。調(diào)整激光功率等的檢測條件，確保在觀察動物種類特異性峰值的m/z2450-2750領(lǐng)域能得到良好的分辨率。通過對SDS-PAGE蛋白條帶進行胰蛋白酶解后的樣品，進行MALDI-TOF MS檢測。
通過MALDI-TOF MS技術(shù)找到山羊絨、羊毛、牦牛毛三者之間的差異峰值區(qū)間m/z 2450-2750和特異峰值。如圖所示。
MALDI-TOF MS 中的動物物種類特異性峰值
島津應(yīng)對方案和機型
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