全二維液相色譜法分析葛根湯顆粒中的有效成分
發(fā)布時間:2024-02-22 閱讀次數(shù)：522次
全二維(Comprehensive 2D-LC)液相色譜技術是復雜樣品分離的理想方案。使用雙流路/雙閥交替切換設計，將第一維的流出的組分連續(xù)轉(zhuǎn)移到第二個色譜柱 (第二維) 繼續(xù)分離，如此兩個獨立的分離模式正交組合可實現(xiàn)盡可能高的峰容量，特別適合于分析天然產(chǎn)物、中藥、藥物雜質(zhì)、食品提取物、合成聚合物等。
在一維中不能分離的化合物，可以在二維中分離，從而發(fā)現(xiàn)因共流出而隱藏的峰
葛根湯（中醫(yī)方劑）具有促進發(fā)汗的作用以及消炎鎮(zhèn)痛效果，對感冒、頭痛、肩周炎等癥狀有緩解作用。由葛根、麻黃、甘草、芍藥等多種中藥材組成，主要成分包含的麻黃堿、甘草酸和肉桂酸對抑制各種感冒癥狀非常有效。在質(zhì)量管理過程中，需要同時識別藥物中存在的多種有效成分，對復雜樣品進行高分離度分離，使用全二維液相色譜儀 Nexera-e 是一種非常有效的手段。
Nexera-e全二維液相色譜儀（PDA檢測器）
與許多傳統(tǒng)中藥一樣，葛根湯含有許多極性較大的化合物，所以pH值是實現(xiàn)分離最佳化的重要參數(shù)。本示例中，基于采用半微量反相柱和中性pH流動相進行一維分離，采用超高速反相柱和酸性pH流動相進行二維分離。此外，還對三種不同廠家的商品化葛根湯顆粒進行了比較，并測定了有效成分甘草酸的含量。
1分析條件
2自動梯度功能
通常LC x LC（反相x反相）的分析過程中，隨著定量環(huán)轉(zhuǎn)移來的1D有機溶劑濃度的增加，2D的分離和峰形可能會因溶劑效應而惡化，造成分離不良。而Nexera-e的“自動梯度功能”能夠很好地解決這個問題，它可根據(jù)1D的梯度程序和調(diào)制時間自動調(diào)整2D的梯度洗脫程序，創(chuàng)建復雜的LC x LC梯度條件就像常規(guī)LC的參數(shù)設置一樣簡單。
梯度時間程序，1D（藍色），2D（粉色）
3標準溶液測試
以甘草酸為標準溶液進行了測試，建立了校正曲線，并進行了重復性考察（n=6）。具有優(yōu)異的線性和重復性。下圖為甘草酸標準溶液的二維等高線圖，橫軸顯示一維保留時間，縱軸顯示二維保留時間。
甘草酸標準溶液的全二維等高線圖(50mg/L)
4不同樣品對比
對三種商品化的葛根湯顆粒進行了分析，上圖為它們的二維等高線圖。因為提供了足夠高的分離度，從二維等高線圖中可以很清楚地觀察到不同樣品間的差異。另外，實驗成功地測定了顆粒中有效成分甘草酸的含量，樣品C所含的甘草酸含量最高。
5總結
1 Nexera-e全二維液相色譜儀提供足夠高的分離，可實現(xiàn)對樣品更深入全面的理解，是復雜樣品分離的理想方案。
2 通過Nexera-e的自動梯度功能，第二維的梯度設置根據(jù)調(diào)制時間自動生成，可輕松設置第二維程序。
3 Nexera-e 系統(tǒng)提供高耐壓高穩(wěn)定高精確的輸液和2D切換，分析結果具有優(yōu)異的重復性和可靠性。
注：本文中所用數(shù)據(jù)均為島津?qū)嶒炇姨囟l件下的測試數(shù)據(jù)，結果可能隨實際情況變動
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