島津參與醫(yī)藥新標(biāo)準(zhǔn)制定∣重組膠原蛋白肽圖指紋圖譜分析
發(fā)布時(shí)間:2025-04-20 閱讀次數(shù)：241次
背景介紹
2025年2月26日，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局正式頒布YY/T 1954-2025《重組膠原蛋白肽圖指紋圖譜分析》醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，擬于2026年3月1日實(shí)施。該標(biāo)準(zhǔn)適用于重組膠原蛋白肽圖指紋圖譜分析，描述了液相色譜-高分辨質(zhì)譜法測(cè)定重組膠原蛋白肽圖、覆蓋率和異質(zhì)性分析的方法。該標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)食品藥品檢定研究院歸口，四川省藥品檢驗(yàn)研究院（四川省醫(yī)療器械檢測(cè)中心）、中國(guó)食品藥品檢定研究院和島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司為主要起草單位。島津中國(guó)創(chuàng)新中心使用LCMS-9030全程參與了新標(biāo)準(zhǔn)的研制和驗(yàn)證工作，助您輕松應(yīng)對(duì)新標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施。
標(biāo)準(zhǔn)解讀
膠原蛋白具有良好的生物降解性和生物相容性，成為應(yīng)用最為廣泛的生物材料之一。近些年，膠原敷料、膠原海綿、膠原凝膠等膠原制品獲得醫(yī)療器械注冊(cè)證，廣泛用于創(chuàng)面覆蓋、止血和非承力軟硬組織的修復(fù)再生等領(lǐng)域。重組膠原蛋白以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，例如精確的氨基酸序列和構(gòu)型、高純度、低免疫原性，從而擁有出色的安全性和穩(wěn)定性，成為醫(yī)療和醫(yī)美市場(chǎng)的新寵。國(guó)內(nèi)已有多種不同表達(dá)體系的重組膠原蛋白類產(chǎn)品獲批而應(yīng)用于臨床。基于產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和監(jiān)管的需要，2022年國(guó)家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布《YY/T 1849-2022 重組膠原蛋白》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。然而由于各廠家表達(dá)體系、重組工藝、所選核酸序列的長(zhǎng)度、重復(fù)片段的組合與拼接方式不盡相同，重組膠原蛋白不可忽視的異質(zhì)性成為該類產(chǎn)品質(zhì)量評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制的重要項(xiàng)目。目前針對(duì)重組膠原蛋白理化性能表征、生物安全性評(píng)價(jià)等各項(xiàng)研究正在有序推進(jìn)。膠原產(chǎn)品屬于大分子，可用液相色譜法、MALDI質(zhì)譜法和凝膠電泳法對(duì)其整體性能進(jìn)行表征。然而上述方法對(duì)結(jié)構(gòu)類似的膠原蛋白區(qū)分度不足，且對(duì)膠原內(nèi)部精細(xì)結(jié)構(gòu)的變化識(shí)別能力有限。鑒于此，中國(guó)食品藥品檢定研究院醫(yī)療器械檢定所與島津中國(guó)創(chuàng)新中心合作開(kāi)展基于生物信息學(xué)質(zhì)譜分析技術(shù)的重組膠原肽圖指紋圖譜的分析方法建立及應(yīng)用研究。YY/T 1954-2025行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的頒布對(duì)不同來(lái)源重組膠原產(chǎn)品精準(zhǔn)鑒別及產(chǎn)品穩(wěn)定性評(píng)價(jià)，為重組膠原蛋白行業(yè)規(guī)范化、高質(zhì)量發(fā)展提供了依據(jù)，也為中國(guó)生物經(jīng)濟(jì)戰(zhàn)略的實(shí)施注入了新動(dòng)能。
圖1. YY/T 1954-2025《重組膠原蛋白肽圖指紋圖譜分析》醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布稿
肽圖指紋圖譜法是將重組膠原蛋白樣品用適宜的蛋白酶酶解(如胰蛋白酶),用高效液相色譜進(jìn)行分離獲得肽圖指紋圖譜;利用高效液相色譜-高分辨率質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行分析得到多肽一級(jí)、二級(jí)譜圖,然后與理論氨基酸序列酶解肽段匹配,進(jìn)行膠原蛋白肽段覆蓋率分析,用于評(píng)價(jià)重組膠原蛋白的符合性。利用肽圖指紋圖譜可進(jìn)行異質(zhì)性分析。例如，N端、C端修飾,以及各種其他翻譯后修飾(如脫酰胺化、氧化、異構(gòu)化、碎片化、二硫鍵錯(cuò)配、N-連接和 O-連接的寡糖、糖基化、聚集等)，評(píng)價(jià)產(chǎn)品工藝的穩(wěn)定性。
島津解決方案
島津公司是著名的分析儀器制造廠商，島津四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(LCMS-9030)具有穩(wěn)定性好，準(zhǔn)確度高，靈敏度高和采集速度快的優(yōu)點(diǎn)。其高通量非靶向檢測(cè)功能（DIA）在蛋白質(zhì)鑒定中正發(fā)揮越來(lái)越大的作用?；跍?zhǔn)確的色譜保留時(shí)間，ppm級(jí)的質(zhì)量準(zhǔn)確度，真實(shí)同位素峰形和高分辨特征碎片離子信息，LCMS-9030同時(shí)具有蛋白質(zhì)定性和定量的能力，適用于蛋白類產(chǎn)品的精準(zhǔn)鑒別和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定性評(píng)價(jià)。
分析儀器
圖2. 島津液相系統(tǒng)Nexera LC-40 +高分辨質(zhì)譜儀LCMS-9030
分析條件
色譜柱：Shim-pack Arata Peptide C18（粒徑 2.2um, 150 mm x 2.0 mm）。
流動(dòng)相為：0.1%甲酸水溶液，0.1%甲酸60%乙腈水溶液
流速：0.3 mL/min梯度洗脫
柱溫：30℃
質(zhì)譜：離子源：ESI（+）
圖3.某重組膠原產(chǎn)品的肽圖
圖3為某廠家采用酵母菌表達(dá)的重組人III型膠原產(chǎn)品的肽圖。該膠原含有474個(gè)氨基酸，包括16個(gè)賴氨酸和23個(gè)精氨酸。采用胰蛋白酶酶解，其余473個(gè)氨基酸均被高分辨質(zhì)譜有效識(shí)別，肽段覆蓋率為: 99.79%。異質(zhì)性分析結(jié)果顯示該重組膠原產(chǎn)品主要修飾類型為甲硫氨酸氧化、天冬酰胺脫酰胺化、谷氨酰胺脫酰胺化、天冬酰胺脫胺化和焦谷氨酸化。
結(jié)論
在重組膠原蛋白醫(yī)療和醫(yī)美市場(chǎng)蓬勃發(fā)展的今天，重組膠原蛋白產(chǎn)品的質(zhì)控顯得尤為關(guān)鍵。島津公司先進(jìn)的分析技術(shù)助力重組膠原肽譜新標(biāo)準(zhǔn)的頒布。未來(lái)，我們期待與更多的醫(yī)藥監(jiān)管機(jī)構(gòu)和科研團(tuán)隊(duì)攜手合作，共同推動(dòng)醫(yī)藥檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步與發(fā)展，為人類的健康事業(yè)貢獻(xiàn)更多力量。
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