《中國藥典》2025年版0512液相色譜法應對方案 梯度延遲體積
發(fā)布時間:2025-05-19 閱讀次數(shù)：166次
導讀
梯度延遲體積概念及對分析的影響
在藥典四部“0512高效液相色譜法”中，提到如梯度微調后仍不能滿足系統(tǒng)適用性要求，通常應考慮滯留體積（也稱延遲體積）的緣故或更換色譜柱。
梯度延遲體積：是指從流動相混合點至柱入口之間的體積，影響延遲體積的參數(shù)包括泵、混合器，進樣器，最后到色譜柱，以及鏈接系統(tǒng)各部件的接頭。梯度洗脫中延遲體積非常重要，特別是復雜樣品的分析，低的延遲體積具有更快的梯度響應時間，同一樣品在同一色譜柱上能夠獲得更好的分辨率。
若在實際使用中與方法開發(fā)時延遲體積有較大差異，會顯著影響梯度響應時間，從而導致色譜分析中分離度、保留時間、相對保留時間受到顯著影響。如在中藥特征圖譜、一標多測項目，化藥有關物質項目中相對保留時間作為常見評價指標，若相對保留時間超出規(guī)定值范圍，可以將延遲體積差異作為考慮因素。
解決思路
藥典原文中提到應考慮方法開發(fā)時的系統(tǒng)與實際使用系統(tǒng)之間滯留體積的差異，在開始梯度程序前增加一個等度平衡階段，通過調整等度階段時間來調整梯度時間點，以與所使用的分析設備相適應。如驗證證明分析方法應用時不需等度平衡，則可省略這一等度階段。
延遲體積解決方案
1. 選擇延遲體積接近的儀器，但標準制定時系統(tǒng)往往是未知的。
2. 更換硬件配置，但操作較為繁瑣。
3. 截止進樣功能，通過減小進樣器模塊體積從而減小延遲體積。島津液相色譜工作站內(nèi)置設置截止環(huán)模式，操作簡便。
4. 調整梯度起點功能，島津液相色譜工作站內(nèi)置多種進樣模式，可選擇進樣前和進樣后兩種模式，操作簡便。
Nexera LC-40系列梯度起始點調整功能
i-Series LC-2050/2060梯度起始點調整功能
典型應用案例
1、梯度起始點調整（進樣前） 遠志配方顆粒特征圖譜
從遠志配方顆粒驗證結果看，標準模式下，峰4實測RRT偏差大于標準要求的±10%。梯度起點調整（進樣前500 μL）后，峰4實測RRT偏差小于±10%，且其他峰結果更優(yōu)。
2、梯度起始點調整（進樣后） 野菊花配方顆粒特征圖譜
標準模式下，實測RRT偏差在 -9.77~0.24%之間。梯度起點調整后，實測RRT偏差在 -6.74~0.12%之間，RRT得到改善。
3、截止環(huán)功能進樣 首烏藤配方顆粒特征圖譜
正常進樣條件下，峰1的RRT大于10%，使用截止環(huán)進樣后所有峰的RRT均在±10%之內(nèi)，符合標準要求。
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