《中國(guó)藥典》2025年版0512液相色譜法應(yīng)對(duì)方案 溶液制備溶劑效應(yīng)
發(fā)布時(shí)間:2025-05-23 閱讀次數(shù)：197次
導(dǎo)語(yǔ)
溶劑效應(yīng)概念及對(duì)分析的影響
在藥典“溶液制備”章節(jié)中，提到為減少溶劑峰和色譜峰的畸變，制備供試品溶液和參比物質(zhì)溶液可用流動(dòng)相（或梯度起始比例流動(dòng)相組成）作為溶劑，這是首次在0512通則中收載溶劑效應(yīng)解決方式。
溶劑效應(yīng)：樣品注入色譜系統(tǒng)后，兩端靠近流動(dòng)相的目標(biāo)物逐漸擴(kuò)散進(jìn)入流動(dòng)相，中心區(qū)域目標(biāo)物仍溶在原溶劑中，目標(biāo)物進(jìn)入色譜柱后，流動(dòng)相氛圍中的目標(biāo)物以正常速度被洗脫，溶劑氛圍中的目標(biāo)物因強(qiáng)溶劑洗脫，移動(dòng)速度快，樣品在空間上開始分裂，即樣品溶劑的洗脫強(qiáng)度強(qiáng)于流動(dòng)相強(qiáng)度而導(dǎo)致的色譜峰展寬，分叉(嚴(yán)重時(shí)分裂)的現(xiàn)象，另外在多個(gè)項(xiàng)目中我們發(fā)現(xiàn)可能會(huì)出現(xiàn)峰形前延、肩峰等現(xiàn)象，而峰形較差會(huì)顯著影響定性和定量指標(biāo)。
在梯度洗脫中，溶劑效應(yīng)對(duì)出峰較早的色譜峰影響更為明顯。溶劑效應(yīng)會(huì)影響峰形，從而影響理論塔板數(shù)、分離度等，應(yīng)盡可能改善該現(xiàn)象！
溶劑效應(yīng)解決參考方案
1. 使用初始流動(dòng)相溶解待測(cè)樣品，藥典首次收載該方法。
2. 減少進(jìn)樣體積，需要注意靈敏度是否滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。
3. 增加柱前管路的體積，需要改配置。
4. Co-injection（同時(shí)注入） 進(jìn)樣功能，軟件中可直接選擇該模式，操作簡(jiǎn)便。
5. 加水稀釋劑進(jìn)樣，需要注意靈敏度是否滿足要求。
推薦儀器方案
典型應(yīng)用案例
1、《中國(guó)藥典》2025年版 石淋通片【指紋圖譜】
石淋通片增加了【指紋圖譜】和【含量測(cè)定】的項(xiàng)目。在進(jìn)行對(duì)照品夏佛塔苷進(jìn)樣過程中，發(fā)現(xiàn)了較嚴(yán)重的溶劑效應(yīng)，可見下圖對(duì)比圖。使用標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣方式，由于溶劑效應(yīng)會(huì)導(dǎo)致峰分叉，采用 Co-injection 進(jìn)樣功能可有效解決此問題。
2、《中國(guó)藥典》2025年版 2341農(nóng)藥殘留量測(cè)定法
人參禁用農(nóng)藥項(xiàng)目分析某化合物（左：標(biāo)準(zhǔn)模式 右：Co-injection模式）
延胡索禁用農(nóng)藥項(xiàng)目分析某化合物（左：標(biāo)準(zhǔn)模式 右：Co-injection模式）
禁用農(nóng)藥相關(guān)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施已經(jīng)有四年，2025版藥典進(jìn)一步增加檢測(cè)目標(biāo)物數(shù)量，某些藥材在做該項(xiàng)目時(shí)，在出峰較早的化合物存在明顯的溶劑效應(yīng)現(xiàn)象，導(dǎo)致峰形出現(xiàn)分叉（嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)分裂）、肩峰、峰展寬及峰前延等，使用島津Co-injection功能有效解決了禁用農(nóng)藥和限用農(nóng)藥部分化合物峰形問題，并提升了化合物響應(yīng)，有助于解決自動(dòng)積分失效和定性定量準(zhǔn)確度等問題。
3、《中國(guó)藥典》2025年版2342植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留量測(cè)定法 第一法59種
左：標(biāo)準(zhǔn)模式 右：Co-injection模式
反式玉米素在使用co-injection功能后，峰形對(duì)稱尖銳，解決雙峰問題。
4、杜仲配方顆粒國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)【含量測(cè)定】
杜仲配方顆粒標(biāo)準(zhǔn)起初要求理論塔板數(shù)按松脂醇二葡萄糖苷峰計(jì)算理論塔板數(shù)應(yīng)不低于10000,在后續(xù)的修訂稿中修訂為不低于8000。島津技術(shù)團(tuán)隊(duì)在走訪配方顆粒企業(yè)時(shí)，客戶提到即使修訂為8000的要求，對(duì)色譜柱選型要求很高，并且耐用性需要完善，島津技術(shù)團(tuán)隊(duì)與客戶共同尋找背后可能存在的原因和解決辦法，最終發(fā)現(xiàn)兩種方案可以解決（Co-injection進(jìn)樣功能或者優(yōu)化有機(jī)相比例為22%），兩種方案任選其一即可。
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